用免疫測(cè)定法分析HbA1c
一種典型的方法是對(duì)葡萄糖和β-鏈的前5-10個(gè)氨基酸使用特異性抗體(通常是單克隆抗體)。這種抗體是乳膠涂層的。還有一種凝集劑,它是一種合成聚合物,具有抗體靶向的HbA1c部分的多個(gè)拷貝。凝集劑與抗體反應(yīng)產(chǎn)生光散射和吸光度增加。
來自血液樣品的HbA1c然后與凝集劑競(jìng)爭(zhēng)抗體膠乳結(jié)合位點(diǎn),并因此減少光的散射和吸光度。所以血液中的HbA1c越大,散射光的吸光度越小。由此計(jì)算HbA1c的量,并且總血紅蛋白可以通過在血紅蛋白的Soret吸收帶處或附近(410-420nm)測(cè)量或通過在約540nm處通過Drabkins方法(氧化和轉(zhuǎn)化為氰化血紅蛋白)來測(cè)定,或者使用堿性血紅素試驗(yàn)。
使用免疫測(cè)定程序的測(cè)定平臺(tái)包括:Siemens Healthcare Diagnostics DCA 2000和Advia 1650,Dimension,Roche Cobas和Hitachi以及Beckman分析儀。大多數(shù)對(duì)衰老或其他化學(xué)或自由基類型反應(yīng)產(chǎn)生的血紅蛋白反應(yīng)不會(huì)發(fā)生在HbA1c位點(diǎn),而該方法組中的抗體所針對(duì)的位置是HbA1c位點(diǎn)。由于這個(gè)原因,這種類型的方法通常更容忍老化/降解反應(yīng),預(yù)計(jì)HbA1c對(duì)照比離子交換HPLC程序具有更長(zhǎng)的可用重構(gòu)或開放瓶時(shí)間。